公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

1、細(xì)胞傳代：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入 5ml 培養(yǎng)

液終止消化，再輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）棄上清，沉淀細(xì)胞用 1-2ml 培養(yǎng)基重懸，然后按 1:2 比例進(jìn)行分瓶傳代，最后放入 37℃，5%CO2細(xì)胞

培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

2、細(xì)胞凍存：

1）細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的 80%面積時(shí)，棄 25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液，用 PBS 清洗細(xì)胞一次；

2）添加 0.25%消化液約 1ml 至培養(yǎng)瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細(xì)胞回縮變圓后加入培養(yǎng)液終

止消化，輕輕吹打細(xì)胞使之脫落，然后將懸液轉(zhuǎn)移至 15ml 離心管中，1000rpm 離心 5min；

3）用適量的凍存液（FBS：DMSO=9 ：1）重懸細(xì)胞，并放置于凍存管中；

4）先將細(xì)胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃過夜，24h 后轉(zhuǎn)入液氮中進(jìn)行長期保存。使用程序

降溫盒可直接放入-80℃。

二、細(xì)胞培養(yǎng)操作

1) 復(fù)蘇細(xì)胞：以下細(xì)胞培養(yǎng)凍存處理僅供參考，具體操作步驟以隨貨產(chǎn)品說明書為主。將含有1 mL細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍，加4 mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000 rpm條件下離心3 min，棄去上清液，加1-2 mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入含適量培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10 cm皿中，加入約8 mL培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2) 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

a、棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

b、加1 mL消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，使消化液浸潤所有細(xì)胞，將培養(yǎng)瓶置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2 min（視細(xì)胞情況而定），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加2-3ml培養(yǎng)基終止消化。輕輕打勻后裝入無菌離心管中，1000 rpm離心5 min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2 mL培養(yǎng)液后吹勻。

c、將細(xì)胞懸液按1:2比例分到新的含8 mL培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中，置于培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。 3) 細(xì)胞凍存：待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面 T25 瓶為例；a、收集細(xì)胞及細(xì)胞培養(yǎng)液，裝入無菌離心管中，1000 rpm條件下離心4 min，棄去上清液，用PBS清洗一遍，棄盡PBS，進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)。

b、根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入無血清細(xì)胞凍存液，使細(xì)胞密度5×106~1×107/mL，輕輕混勻，每支凍存管凍存1mL細(xì)胞懸液，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。將凍存管放入-80℃冰箱，24 h后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

三、培養(yǎng)注意事項(xiàng) 

1. 收到細(xì)胞后首先觀察細(xì)胞瓶是否完好，培養(yǎng)液是否有漏液、渾濁等現(xiàn)象，若有上述現(xiàn)象 發(fā)生請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系。

2. 仔細(xì)閱讀細(xì)胞說明書，了解細(xì)胞相關(guān)信息，如細(xì)胞形態(tài)、所用培養(yǎng)基、血清比例、所需 細(xì)胞因子等，確保細(xì)胞培養(yǎng)條件一致，若由于培養(yǎng)條件不一致而導(dǎo)致細(xì)胞出現(xiàn)問題，責(zé)任由 客戶自行承擔(dān)。

3. 用 75%酒精擦拭細(xì)胞瓶表面，顯微鏡下觀察細(xì)胞狀態(tài)。因運(yùn)輸問題，部分細(xì)胞由于溫度 變化及劇烈碰亡破碎形成碎片，是正?，F(xiàn)象。觀察好細(xì)胞狀態(tài)后，75%酒精消毒瓶壁將 T25 瓶置于 37℃培養(yǎng)箱放置 2-4h。

4. 貼壁細(xì)胞可以消化，懸浮細(xì)胞直接混勻收集細(xì)胞，900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，棄上 清。加 5 mL PBS 重懸細(xì)胞，再 900 rpm-1000 rpm 離心 3 min，用新鮮的培養(yǎng)基重懸 細(xì)胞，并接種到新的培養(yǎng)瓶或培養(yǎng)皿中，置于培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

5. 請(qǐng)客戶用相同條件的培養(yǎng)基用于細(xì)胞培養(yǎng)。

6. 建議客戶收到細(xì)胞后前 3 天各拍幾張細(xì)胞照片，記錄細(xì)胞狀態(tài)，便于和我司技術(shù)部溝通 交流。由于運(yùn)輸?shù)脑?，個(gè)別敏感細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不穩(wěn)定的情況，請(qǐng)及時(shí)和我們聯(lián)系，告知細(xì)胞 的具體情況，以便我們的技術(shù)人員跟蹤回訪直至問題解決。

7. 該細(xì)胞僅供科研使用。

8. 備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基 (灌液培養(yǎng)基) 不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說明書細(xì)胞培 養(yǎng)條件新配制的培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。     收到細(xì)胞后第一次傳代建議 1：2 傳代 。

9. 注意：  1:2 傳代就是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè) T25 瓶或者 2 個(gè) 6cm 皿。不是 1 個(gè) T25 瓶傳 2 個(gè)10cm 皿。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 大鼠纖維蛋白原(FG)ELISA試劑盒 PDGF-BB(Human Platelet-Derived Growth Factor-BB)  人血小板衍生生長因子BB 96T

7-Mar： 膜相關(guān)環(huán)指蛋白7抗體 BEL-7405細(xì)胞，肝癌細(xì)胞 膀胱癌細(xì)胞,BI U-87細(xì)胞 615小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤瘤株;DCS

ESAM Others Rat 大鼠 ESAM / Endothelial Cell Adhesion Molecule 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 大鼠纖維蛋白原(Fbg)ELISA試劑盒 ANG- II (Mouse angiotension II )  小鼠血管緊張素Ⅱ 96T

8-Mar： 膜相關(guān)環(huán)指蛋白8抗體 人腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞總RNAHIMEC NA

293-mTLR5 人胚腎細(xì)胞 Human embryonic kidney cell line 293-mTLR5 DMEM+10% FBS+10ug/ml Blasticidin 大鼠纖維蛋白原(Fb)ELISA試劑盒 TBA  大鼠總膽汁酸 96T

HDLBP： 高密度脂蛋白結(jié)合蛋白抗體 VWF Others Human 人 vWF CHO細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照)

人淋巴成纖維細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL 人凋亡誘導(dǎo)因子(AIF)ELISA 試劑盒 glypican 1 0脂?；嫉鞍拙厶?span>-1抗原 0.5mg

HNF3-alpha： 轉(zhuǎn)錄因子HNF-3α抗體 婆羅門牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-3 神經(jīng)母細(xì)胞瘤，SK-N-SH細(xì)胞 SW-13(腎上腺皮質(zhì)腺癌細(xì)胞)

EPHB6 Others Cynomolgus 食蟹猴 EphB6 / EphB6 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 人凋亡信號(hào)調(diào)節(jié)激酶I(ASK-1)ELISA 試劑盒 GPC3(glypican 3; Intestinal protein OCI-5; GTR2-2; MXR7) 0脂酰基醇蛋白聚糖-3(多肽) 0.5mg

HSPB7： 熱休克蛋白β7抗體 CM-M120小鼠角膜上皮細(xì)胞培養(yǎng)基100mL

MT-4人急性淋巴母細(xì)胞白血病細(xì)胞NAMALWA 人Butt`s淋巴瘤細(xì)胞 大鼠多巴胺受體D3(DRD3)ELISA試劑盒 ADM(Human adrenomedullin)  人腎上腺髓質(zhì)素 96T

Phospho-Paxillin (Tyr118)： 0酸化樁蛋白Paxillin抗體 HT-1080細(xì)胞，人纖維肉瘤 人管癌細(xì)胞,T47D細(xì)胞 小膠質(zhì)細(xì)胞生長添加物MGS

MYOC Others Human 人 MYOC / Myocilin 人細(xì)胞裂解液 (陽性對(duì)照) 大鼠多巴胺受體D2(DRD2)ELISA試劑盒 IL-10 mouse  小鼠白介素10 96T

PIM1： 絲酸/蘇酸激酶蛋白Pim1抗體 斑馬魚尾鰭細(xì)胞;AB.9

MG-63, 人骨肉瘤細(xì)胞 大鼠多巴胺受體D1(DRD1)ELISA試劑盒 irGH(Human Immunoreactive growth hormone)  人免疫反應(yīng)性生長激素 96T