特點：
1. 即開即用，用戶只需要提供病毒樣品。
2. 根據(jù)地黃保守序列設(shè)計的專一性引物，與相關(guān)病毒無交叉反應。
3. 靈敏度可以達到幾百拷貝/反應。
4. 一管式熒光定量 PCR 檢測，避免后續(xù)污染。
5. 本試劑盒足夠 50 次 20μL 反應體系的熒光定量 PCR。
6. 本產(chǎn)品只適用于科研，不能用于臨床診斷。

使用方法：
一、樣品采集：
1、食品樣品：樣品的采集與預培養(yǎng)按照樣品的采集與預培養(yǎng)按照《食品衛(wèi)生微生物學檢驗阪崎腸桿菌檢驗要求進行。
2、血液樣品：用無菌注射器抽取受檢者靜脈血2mL，注入無菌EDTA2Na(或檸檬酸鈉)抗凝管，立即混勻。
3、糞便樣品：取糞便置于滅菌的收集管中送檢。
4、病灶部位樣品：取發(fā)病部位新鮮滲出物、粘液膿血送檢。
一、稀釋 PCR 陽性對照（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）
1. 注意：由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。為增加產(chǎn)品穩(wěn)定性和避免擴散傳染性病原，本產(chǎn)品不提供活體樣品做陽性對照，只提供可以直接使用的 DNA段作為陽性對照。
2. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
3. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液（用帶芯槍頭，下同）。
4. 在 7 號管中加入 5 μL 1×10E8 拷貝/μL 的陽性對照，充分震蕩 1 分鐘，得1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
6. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照到 5 號管中，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的陽性對照。放冰上待用。
7. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的陽性對照。放冰上待用。
注：上述樣品建議經(jīng)過增菌后，收集培養(yǎng)物用于檢測。 
二、DNA提?。?/span>
可采用PCR試劑盒配備的DNA抽提液，按以下說明進行DNA核酸的粗提。也可采購上海澤葉生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA提取試劑盒(過柱法-熒光配套)或其他合適的商業(yè)化產(chǎn)品，并按照相應試劑盒說明進行操作。
1、液體培養(yǎng)物：取液體培養(yǎng)物100μL加到1.5mL無菌離心管中，8000rpm離心3min，盡量吸棄上清，加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進行PCR反應。
2、固體培養(yǎng)物：挑取單克隆菌落與50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min，取上清5μL進行PCR反應。
3、糞便樣品：挑取米粒大小糞便于滅菌離心管中，加入0.5mL生理鹽水，振蕩混勻，13000rpm離心3分鐘，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應。
4、其他液體標本：取標本2-3mL，13000rpm離心3min，棄上清，沉淀中加入50μL DNA抽提液充分混勻，100℃恒溫10min，13000rpm離心3min取上清5μL進行PCR反應。
注：陽性對照和陰性對照為已經(jīng)抽提好的核酸(無需提取)，直接取5μL加入到反應體系中即可。由于陽性對照濃度較高，建議在樣品制備區(qū)域加入陽性對照。 
實驗流程：
1. 整個檢測過程應嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作，各區(qū)實驗服、儀器 、耗材應獨立使用，不能混用；實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭；樣本處理區(qū)應配有生物安全柜，樣本處理在生物安全柜中進行操作；三個區(qū)應該配有紫外線殺菌裝置。
2. 為避免RNA降解，樣本處理過程應在0-4℃條件下操作，且完成實驗后立即上機檢測；樣本處理過程中使用的器具耗材應經(jīng)過無核酶處理。
3. 每次實驗應該設(shè)置陰、陽性對照。
4. 試劑盒所有試劑在使用前應該在常溫下充分融化混勻，并應瞬時離心。
5. 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在一次使用前應全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū)，并單獨存放。
6. 為防止熒光干擾，應避免裸手直接接觸PCR反應管，并應避免在PCR反應管上進行任何標記。
7. 儀器 擴增相關(guān)參數(shù)應按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置；不同批號試劑不能混用。
8. ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正，淬滅基因選擇None。
9. 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應該進行無害化處理后方可丟棄。
儲存條件：
14℃或－20℃樣品收集、處理及保存方法
1. 血清：使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。
2. 血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000 轉(zhuǎn)離心30 分鐘取上清。
3. 細胞上清液：3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘去除顆粒和聚合物。
4. 組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000 轉(zhuǎn)離心10 分鐘取上清。
5. 保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
BRL-3A細胞，大鼠正常肝細胞 SK-N-SH(神經(jīng)母細胞瘤細胞) 人髓母細胞瘤細胞;Daoy櫟櫻酸(標準品)Roburic acid質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

CSF2 Protein Rat 重組大鼠 GM-CSF / CSF2 蛋白 (Fc 標簽)連翹苷(標準品)Phillyrin質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

SW626(人卵巢癌細胞) 5×106cells/瓶×2 甲型流感 H5N1 (A/chicken/ Yamaguchi/7/2004) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 人細胞裂解液 (陽性對照) 連翹酯苷A(標準品)Forsythoside A質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

人食道平滑肌細胞HESMC連翹酯苷B（標準品）Forsythoside B質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品

STXBP3 Others Human 人 STXBP3 / UNC-18C 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 蓮心堿（標準品）Liensinine質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標準品
BxPc-3-EGFP-puro (慢病毒構(gòu)建穩(wěn)定株)人原位胰腺腺癌細胞 BxPc-3-EGFP-puro (leiviral consuct stable sain) in situ pancreatic adecarcima cells 1640+10% FBS+2μg/ml puromycin1酸二酯酶 (比活度：>20 U/mg，BC)質(zhì)量規(guī)格：比活度：>20 U/mg，BCPhosphodiesterase I from Crotalus adamanteus Vem

IL2 Protein Human 重組人 Ierleukin-2 / IL-2 蛋白化丙啶(>95% (HPLC),BC)質(zhì)量規(guī)格：>95% (HPLC),BCPropidium iodide

人食道上皮細胞(HEEC)(5×105 ) RN-c, 大鼠皮質(zhì)神經(jīng)元 Rattus血管緊張素III質(zhì)量規(guī)格：>97%,BRAngiotensin III,human

大額牛皮膚細胞;BFR-S3蜂毒明肽; 蜂針液明肽質(zhì)量規(guī)格：BR,>97%Apamin

EPHB1 Others Cymolgus 食蟹猴 EphB1 / EPHT2 人細胞裂解液 (陽性對照) 枸櫞酸氯米芬,克羅米芬質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRClomiphene
GB Others Cytomegalovirus/CMV 巨細胞病毒 HCMV gB 人細胞裂解液 (陽性對照) 雜質(zhì)B質(zhì)量規(guī)格：美國進口Ranitidine Impurity B

小鼠誘導性多潛能干細胞;PUMC-mips-B6質(zhì)量規(guī)格：美國進口Ranitidine

CD59A Others Mouse 小鼠 CD59a / Protectin / MAC-IP 人細胞裂解液 (陽性對照) 2-氨基-5,6-二氯-3(4H)-喹唑啉醋酸(阿那格雷雜質(zhì)B)質(zhì)量規(guī)格：美國進口2-Ami-5,6-dichloro-3(4H)-quinazoline Acetic Acid(Anagrelide Impurity B)

C26瘤 結(jié)腸癌3-羥基阿那格雷質(zhì)量規(guī)格：美國進口3-Hydroxy Anagrelide

THLE-3人肝永生化細胞 THLE-3 human liver immortalized cell MD 21793的BEGM培養(yǎng)基(目錄號CC3170)雷洛昔芬4'-葡萄糖苷酸質(zhì)量規(guī)格：美國進口Raloxifene 4'-Glucuronide
黃芩染料法PCR鑒定試劑盒說明書MIF Others Mouse 小鼠 MIF / Migration Inhibitory Factor 人細胞裂解液 (陽性對照) 鐵蛋白(馬脾)，英文名或英文縮寫：HSF，級別：BR，10-20u/mg，規(guī)格：100u

16HBE 人支氣管上皮細胞1.10-癸二醇 1,10-Dqccnqdiol 11-47-0

CL-0263BGC-803(人胃癌細胞)5×106cells/瓶×2D-扁桃醋 Mcndqlic ccid 611-71-

RDFs, 大鼠成纖維細胞MES,FREEACID,MOHYDR