五月天在线观看免费视频播放,人人草人人,色视频综合,狠狠色婷婷丁香六月,五月婷婷六月丁香综合,开心激情综合网|午夜+韩国大片,日本无码欧美激情视频二区,japanese日本熟妇伦,国产国产精品人在线视,狠狠躁夜夜躁人人躁婷婷视频,√天堂资源在线中文8在线最新版,国产一区二区精品成人av,在线韩漫画大全免费观看,欧美黑人猛性暴交,操日本美女插进去视频,水蜜桃午夜福利在线观看,色综合久久一区二区观看

PCR的循環(huán)參數(shù)：

1.  預(yù)變性（Initial denaturation）

模板DNA全變性與PCR酶的全激活對PCR能否成功至關(guān)重要，建議加熱時間參考試劑說明書，一般未修飾的Taq酶激活時間為兩分鐘。

2. 循環(huán)中的變性步驟

循環(huán)中一般95℃，30秒足以使各種靶DNA序列全變性，可能的情況下可 縮短該步驟時間，變性時間過長損害酶活性，過短靶序列變性不徹di，易造成擴(kuò)增失敗。

3. 引物退火（Primer annealing）

退火溫度需要從多方面去決定，一般根據(jù)引物的Tm值為參考，根據(jù)擴(kuò)增的長度適當(dāng)下調(diào)作為退火溫度。然后在此次實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)上做出預(yù)估。退火溫度對PCR的特異性有較大影響。

4. 引物延伸

引物延伸一般在72℃進(jìn)行（Taq酶最適溫度）。但在擴(kuò)增長度較短且退火溫度較高時，本步驟可省略。延伸時間隨擴(kuò)增片段長短而定，一般推薦在1000 bp以上，含Pfu及其衍生物的衍生設(shè)定為1 min/kbp。

5. 循環(huán)數(shù)

大多數(shù)PCR含25-40循環(huán)，過多易產(chǎn)生非特異擴(kuò)增。

6. 最后延伸

在最后一個循環(huán)后，反應(yīng)在72℃維持5-15分鐘．使引物延伸全，并使單鏈產(chǎn)物退火成雙鏈。