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細菌數量測定方法歸納
  • 發(fā)布日期:2023-08-21      瀏覽次數:1243
    •     細菌(Bacteria)是生物的主要類群之一,屬于細菌域、細菌界,過去曾經和古菌一起被歸類在原核生物界,但已知古菌更接近真核生物,故原核生物界已被棄用。細菌是所有生物中數量最多的一類。細菌是非常古老的生物,大約出現(xiàn)于37億年前。真核生物細胞中的兩種細胞器:線粒體和葉綠體,通常被認為是來源于內共生細菌。

      1、顏色改變單位法(colour change unit,簡稱CCU)

      這種方法通常用于很小,用一般的比濁法無法計數的微生物,比如支原體等,因為支原體的液體培養(yǎng)物是完-全透明的,呈現(xiàn)為清亮透明紅色,因此無法用比濁法來計數,由于支原體固體培養(yǎng)很困難,用cfu法也不容易計數,因此需要用特殊的計數方法,即CCU法。它是以微生物在培養(yǎng)基中的代謝活力為指標,來計數微生物的相對含量的,下面以解脲脲原體為例,簡單介紹其操作:
      (1)取12只無菌試管,每一管裝1.8ml解脲脲原體培養(yǎng)基。
      (2)在第1管加入0.2ml待測解脲脲原體菌液,充分混勻,從中吸取0.2ml加入第二管,依次類推,10倍梯度稀釋,一直到最末一管
      (3)于37度培養(yǎng),以培養(yǎng)基顏色改變的最末一管作為待測菌液的CCU,也就是支原體的最-大代謝活力,比如第六管出現(xiàn)顏色改變,他的相對濃度就是10的6次方CCU/ml.
      一般來說,比濁法和菌落計數法就可以滿足絕大多數細菌的計數,但是對支原體這樣比較特殊的微生物,用CCU法比較合適。
      測定微生物生長的方法很多,各種方法均有其優(yōu)缺點,也不是在任何情況下都適用。在微生物學工作中一般常用的是平皿菌落計數法、計數器法和比濁法。至于哪種方法比較適合你,得根據你的具體條件而定。

      2、計數器測定法:
      即用血細胞計數器進行計數。取一定體積的樣品細胞懸液置于血細胞計數器的計數室內,用顯微鏡觀察計數。由于計數室的容積是一定的(O.1mm3),因而根據計數器刻度內的細菌數,可計算樣品中的含菌數。本法簡便易行,可立即得出結果。
      本法不僅適于細菌計數,也適用于酵母菌及霉菌孢子計數。

      3、電子計數器計數法:
      電子計數器的工作原理是測定小孔中液體的電阻變化,小孔僅能通過一個細胞,當一個細胞通過這個小孔時,電阻明顯增加,形成一個脈沖,自動記錄在電子記錄裝置上。
      該法測定結果較準確,但它只識別顆粒大小,而不能區(qū)分是否為細菌。因此,要求菌懸液中不含任何碎片。

      4、活細胞計數法
      常用的有平板菌落計數法,是根據每個活的細菌能長出一個菌落的原理設計的。取一定容量的菌懸液,作一系列的倍比稀釋,然后將定量的稀釋液進行平板培養(yǎng),根據培養(yǎng)出的菌落數,可算出培養(yǎng)物中的活菌數。此法靈敏度高,是一種檢測污染活菌數的方法,也是目前國際上許多國家所采用的方法。使用該法應注意:①一般選取菌落數在30~300之間的平板進行計數,過多或過少均不準確;②為了防止菌落蔓延,影響計數,可在培養(yǎng)基中加入O.001%2,3,5一氯化三苯基四氮唑(TTC);③本法限用于形成菌落的微生物。
      廣泛應用于水、牛奶、食物、藥品等各種材料的細菌檢驗,是最chang用的活菌計數法。

      5、比濁法
      比濁法是根據菌懸液的透光量間接地測定細菌的數量。細菌懸浮液的濃度在一定范圍內與透光度成反比,與光密度成正比,所以,可用光電比色計測定菌液,用光密度(OD值)表示樣品菌液濃度。
      此法簡便快捷,但只能檢測含有大量細菌的懸浮液,得出相對的細菌數目,對顏色太深的樣品,不能用此法測定。

      6、測定細胞重量法
      此法分為濕重法和干重法。濕重法系單位體積培養(yǎng)物經離心后將濕菌體進行稱重;干重法系單位體積培養(yǎng)物經離心后,以清水洗凈放人干燥器加熱烘干,使之失去水分然后稱重。
      此法適于菌體濃度較高的樣品,是測定絲狀真菌生長量的一種常用方法。

      7、測定細胞總氮量或總碳量
      氮、碳是細胞的主要成分,含量較穩(wěn)定,測定氮、碳的含量可以推知細胞的質量。此法適于細胞濃度較高的樣品。




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